La séparation des composés est provoquée par l'écoulement continu d'un éluant passant dans la colonne par gravité ou sous l'effet d'une faible pression. Les composés sont entraînés par l'éluant à des vitesses différentes en fonction de leurs affinités avec la silice et avec l'éluant.
La technique de la chromatographie sur colonne permet la séparation des différents constituants d'un mélange, mais elle peut être utilisée couplée à un moyen de détection, comme par exemple une spectroscopie UV – visible ou une spectrométrie de masse et on obtient ainsi une chaîne complète automatisable d'analyse.
Préparation de la colonne
Verser du gel de silice jusqu'aux 2/3 de la hauteur de la pipette, puis humidifier le gel de la colonne avec de l'eau distillée. Terminer avec environ 1 cm de sable, puis arroser délicatement d'eau. Il ne faut pas que le jet soit trop violent pour ne pas perturber votre installation.
On utilise une colonne en verre équipée d'un verre fritté et d'un robinet. La colonne est remplie d'une poudre, généralement de l'alumine ou de la silice. Un mélange est placé en haut de la colonne. Selon la nature de l'éluant et du contenu de la colonne, certaines molécules sont plus facilement éluées que d'autres.
Le but est toutefois différent: La chromatographie sur colonne sert à séparer des produits, soit à purifier un produit de réaction. C'est la méthode standard de purification dans un laboratoire de chimie organique.
La CCM se déroule en trois étapes : préparation de la cuve, préparation de la plaque, et élution.
L'efficacité d'une colonne se détermine généralement par le nombre de plateaux théorique que la colonne aura vis-à-vis du composé considéré. Le nombre de plateaux théorique correspond au nombre de fois qu'un composé sera échangé entre la phase mobile et la phase stationnaire.
Le mélange eau alcool 50/50 permet cette séparation car les deux colorants sont solubles dans cet éluant et migrent à des hauteurs différentes mais le colorant bleu atteint le front de l'éluant. c) Le rapport frontal d'une espèce dépend de l'éluant : la hauteur de migration des colorants étant différentes chaque fois.
Présentation de la technique
La chromatographie est une technique séparative analytique et/ou préparative. Elle consiste à faire migrer les constituants à séparer sur une phase stationnaire immobile, à l'aide d'une phase mobile, liquide ou gazeuse, de nature différente.
Re : Comment choisir l'éluant pour une chromatographie ? Bonjour, On utilise plutôt un mélange cyclohexane/AcOEt (L'éther est polaire). Si tu as des composés polaires, tu peux essayer un mélange dichlo/MeOH.
La chromatographie permet de séparer et d'identifier les espèces chimiques d'un mélange. Elle est basée sur leur différence d'affinité pour deux phases : la phase stationnaire, ou phase fixe et la phase mobile appelée éluant et constituée d'un mélange de solvants.
Le gel de silice est polaire, il a par conséquence une plus grande affinité pour les composés polaires: Un composé peu polaire est peu adsorbé.
La chromatographie sur colonne est basée sur le même principe que la chromatographie sur couche mince, sauf que la silice ne se trouve pas sur une plaque mais dans une colonne. Cette technique est très utilisée dans la purification en chimie organique.
Effet de capillarité
Les colorants qui se trouvent dans le feutre (et sur le papier ensuite) sont solubles dans l'eau. L'eau monte le long du papier par capillarité.
La chromatographie sur couche mince (CCM, en anglais TLC pour Thin layer chromatography) est une technique de chromatographie planaire dont la phase mobile est liquide. Elle est couramment utilisée pour séparer des composants dans un but d'analyse (CCM analytique) ou de purification (CCM préparative).
La chromatographie peut être analytique (visant à l'identification des substances présentes) ou préparative (visant à la séparation des constituants d'un mélange). La chromatographie analytique est largement utilisée à l'échelle du laboratoire, en chimie organique.
- la filtration : on utilise cette technique pour séparer un mélange hétérogène liquide + solide, comme l'eau et le sable. On utilise un tamis, une passoire, un filtre à café… - la décantation : on utilise cette technique pour séparer un mélange hétérogène liquide + solide ou liquide + liquide.
2) Séparer deux liquides miscibles On peut distiller un mélange eau / alocol, par ex du cidre. Pour séparer deux liquides miscibles, il suffit d'utiliser la distillation vue auparavant. Celui des deux liquides qui bout le premier par vers le réfrigérant tandis que l'autre reste dans le ballon.
Solvant frais employé en chromatographie en phase liquide pour séparer un corps absorbé sur un support.
L'ordre d'élution est a priori celui des pHi décroissants sur échangeur de cations et des pHi croissants sur échangeur d'anions. Cette ordre n'est que "a priori" puisqu'il peut exister des répartitions de charge hétérogènes et des effets stériques qui perturbent...
La chromatographie en phase gazeuse (CPG) est une technique de chromatographie qui permet de séparer des molécules d'un mélange gazeux, éventuellement très complexe, de nature très diverses. Elle s'applique principalement aux composés gazeux ou susceptibles d'être vaporisés par chauffage sans décomposition.
1-1 – COMMENT AMÉLIORER UNE SÉPARATION EN CHROMATOGRAPHIE ? 2- A temps de rétention constant, on peut diminuer la largeur des pics, le chromatogramme (c) illustre ce phénomène. En pratique, on peut jouer à la fois sur ces 2 paramètres pour améliorer une séparation.
Plus la température du four (et donc de la colonne) est élevée, plus les analytes se déplacent rapidement dans la colonne, mais moins ils interagissent avec la phase stationnaire, et donc moins les analytes sont séparés.
Le facteur de rétention (Rf) est défini comme le rapport de la distance parcourue par l'analyte (da) sur la distance parcourue par l'éluant (ds). à 2<= k <= 10 en chomatographie sur colonne.