L'électrophorèse sur gel d'agarose est communément utilisée pour séparer des molécules en fonction de leur charge, leur taille et leur forme. Il s'agit d'un moyen de séparation particulièrement efficace pour des biomolécules chargées telles que l'ADN, l'ARN et les protéines.
Il est utilisé en biologie moléculaire pour des électrophorèses sur gel. L'agarose se présente sous la forme d'une poudre blanche qui se dissout dans l'eau en ébullition. Lorsque la température descend en dessous de 40 °C, la solution devient un gel.
L'augmentation de la concentration d'agarose dans un gel réduit la vitesse de migration et permet la séparation de fragment d'ADN de plus petite taille. Plus le voltage est important, plus la vitesse de migration augmente.
L'EPS est un examen de biologie médicale qui a pour but la séparation et l'analyse des protéines sériques. Une EPS peut conduire à détecter une immunoglobuline monoclonale, une hypergammaglobulinémie et plus rarement une hypogammaglobulinémie.
Cet effet serait dû à l'augmentation de l'hydrophobie de l'environnement, plutôt qu'à une rigidification du cycle benzénique, celui-ci n'étant pas situé entre les paires de bases. L'utilisation la plus courante est la coloration des gels destinés à la séparation des fragments d'ADN par électrophorèse.
Les tampons de chargement d'ADN sont utilisés pour charger des échantillons d'ADN sur des gels d'agarose ou d'ADN SDS pour l'électrophorèse sur gel. Les tampons de chargement d'ADN contiennent un colorant et un agent de densité.
Mélanger tampon TBE et agarose à raison de 0,8 g d'agarose pour 100 mL de tampon (la proportion d'agarose dépend de la taille des molécules d'ADN à séparer). Faire fondre l'agarose au four à micro-ondes en surveillant pour éviter les projections ou au bain marie.
En fonction du pH la protéine sera chargée positivement ou négativement, elle migrera donc vers l'anode (chargée +) ou la cathode (chargée -). Les gels supportés prêts à l'emploi sont constitués d'une mince couche d'agarose coulée sur un support plastique de 100 mm x 75 mm permettant leur manipulation aisée.
Comme chaque protéine est plus ou moins soluble en solution selon sa composition, on peut en séparer plusieurs en fonction de leur tendance à précipiter plus ou moins vite quand on change la force ionique de la solution qui les contient.
Chaque atome de phosphore de cette liaison phosphate est attache à quatre atomes d'oxygène. Deux de ces atomes sont liés (par l'intermédiaire d'une molécule de sucre) à un des nucléotides alors que les deux autres groupes oxygène sont relativement libres. Ils portent une charge négative.
L'extraction de l'ADN est une technique permettant d'isoler l'acide désoxyribonucléique (ADN) des cellules ou des tissus. L'ADN ainsi extrait peut ensuite être utilisé pour des recherches de biologie moléculaire, telles que le séquençage, la PCR ou le clonage.
L'Electrophorèse Capillaire (EC) est une technique de séparation analytique. Les composés du mélange sont injectés dans un capillaire, le plus fréquemment de silice vierge et sont séparés à l'aide d'un tampon sous l'effet d'un champ électrique grâce à leurs différences de mobilités.
En biochimie, l'électrophorèse sur gel est utilisée pour séparer les macromolécules biologiques (par exemple l'ADN) en fonction de leur taille et de leur charge électrique. Le gel est constitué d'une matrice de polymère baignant dans un tampon d'électrophorèse conducteur.
Le principal intérêt de l'immunoélectrophorèse est de distinguer le caractère mono-, oligo-, ou polyclonal d'une hyper-gamma-globulinémie. L'utilisation d'antisérums monovalents permet en outre de spécifier la classe et le type de chaînes légères de l'immunoglobuline.
Un tampon d'électrophorèse ou tampon de migration est un tampon conducteur (électrolytes) mis dans les cuves d'électrophorèse pour améliorer les conditions de migration des molécules à séparer sous l'action d'un champ électrique.
C'est une étape importante en recherche fondamentale pour la caractérisation de la fonction (études des propriétés), de la structure, sa composition en acide aminé et des interactions d'une protéine d'intérêt, mais aussi en recherche appliquée et industrie pour préparer des matières et réactifs.
Un critère d'évaluation de la pratique professionnelle est l'énoncé d'un moyen ou d'un élément permettant de satisfaire une référence, c'est-à-dire une source d'information validée.
Le pHi ou pI d'une molécule (la plupart du temps une protéine ou un peptide) est défini comme le pH (potentiel hydrogène) pour lequel la charge globale de cette molécule est nulle ou, autrement dit, le pH pour lequel la molécule est électriquement neutre (forme zwitterionique ou ion mixte).
Absorption de la lumière
Au-dessus de 260 nm, la plus grande partie de l'absorption ultraviolette des protéines provient de leur teneur en tryptophane et parfois en tyrosine et en phénylalanine. Ces acides aminés ont une telle absorption à cause de leur nature aromatique due à la présence d'un cycle benzénique.
Résultats
L'hémoglobine S, moins chargée électriquement que l'hémoglobine A (en raison de la substitution d'un acide glutamique par une valine en position 6 de la chaîne de la bêta-globine), migre moins loin que l'hémoglobine A et peut ainsi être distinguée de celle-ci sur la bande d'acétate de cellulose.
L'électrophorèse de l'hémoglobine sert à détecter les anomalies de forme et de concentration de l'hémoglobine, la protéine des globules rouges qui sert au transport de l'oxygène. Le test fait habituellement suite à des résultats anormaux à la formule sanguine (globules rouges, hémoglobine, VGM, etc.)
Le bromure d'éthidium sert uniquement à visualiser l'ADN sur le gel d'agarose. Il n'intervient pas dans la migration de l'ADN. En mettre dans le gel est suffisant pour voir aux UV les bandes d'ADN. Le problème de l'éthidium, c'est qu'il est chargé positivement et il migre donc dans le sens opposé à l'ADN.
- tampon de concentration : le gel de concentration (en général %T = 3% et %C = 2,67%) est imprégné en tampon [tris-HCl] = 0,125 mol/L pH 6,8 avec [SDS] = 1 g/L .