Le Western blot (immunotransfert) dépasse le concept du test ELISA en permettant la séparation du mélange protéique par taille, charge et/ou conformation. La méthode d'élimination décrite permet de détecter plusieurs cibles, contrairement au test ELISA qui permet de ne détecter qu'une seule protéine.
Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Cette technique permet la séparation et l'identification d'une protéine d'intérêt spécifique dans un mélange complexe de protéines, par exemple, un lysat cellulaire.
Transfert de protéines sur membrane
Les deux méthodes les plus communément utilisées pour le transfert des protéines sont le transfert électrophorétique pour les protéines déjà séparées en gel et la microfiltration (dot-blotting).
Les contrôles de dépôt sur gel sont utilisés pour confirmer que la quantité de protéines déposée est identique sur l'ensemble des pistes du gel, permettant de normaliser le niveau de protéines détectées.
L'analyse du Western blot est ensuite réalisée à l'aide d'un éventail de systèmes d'imagerie différents (par ex., luminescence, réaction colorante, autoradiographique). Note: L'identification d'une protéine d'intérêt dans un Western blot repose entre autres facteurs sur son poids moléculaire.
Le nom du western blot, donné à la technique par W. Neal Burnette, est un jeu de mot à partir de la technique du Southern blot ou transfert de Southern, technique de détection d'ADN nommée d'après son inventeur, Edwin Southern et non d'après le point cardinal.
En France, à Paris et en province, le laboratoire Barla http://labo-barla.eu/ réalise les tests sérologies (Elisa et Western Blot), les PCR, Elispot et les analyses d'exploration du système immunitaire : – PCR pour Borrelia, Bartonella, Rickettsies, Anaplasma, Ehrlichia, Coxiella, Francisella, Néoehrlichia mikurensis.
Le principal intérêt de l'immunoélectrophorèse est de distinguer le caractère mono-, oligo-, ou polyclonal d'une hyper-gamma-globulinémie. L'utilisation d'antisérums monovalents permet en outre de spécifier la classe et le type de chaînes légères de l'immunoglobuline.
Le blocage est nécessaire pour saturer les capacités de liaison libres des surfaces.
Comme chaque protéine est plus ou moins soluble en solution selon sa composition, on peut en séparer plusieurs en fonction de leur tendance à précipiter plus ou moins vite quand on change la force ionique de la solution qui les contient.
Elle est utilisée le plus souvent dans un but analytique mais également parfois pour purifier des molécules solubles. Elle n'est donc pas adaptée à la séparation des lipides. Le principe consiste à soumettre un mélange de molécules à un champ électrique ce qui entraîne la migration des molécules chargées.
Un critère d'évaluation de la pratique professionnelle est l'énoncé d'un moyen ou d'un élément permettant de satisfaire une référence, c'est-à-dire une source d'information validée.
L'interprétation repose sur la distinction de l'isotype : la présence d'IgM évoque une infection à un stade précoce ; les IgM sont encore présentes en début de phase secondaire mais absentes en phase tertiaire ; les IgG apparaissent en fin de phase primaire et sont présentes à titre élevé en phase tertiaire.
Les techniques de Southern blot et de northern blot sont des techniques d'hybridation des acides nucléiques. Elles sont réalisées après séparation des acides nucléiques par électrophorèse et transfert sur membrane de nitrocellulose ou de nylon.
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Il s'agit d'une coloration protéique utilisé en électrophorèse. Il a été utilisé dans le dosage des protéines liant le colorant Bradford.
L'alpha-1-glycoprotéine également appelée orosomucoïde est une protéine de phase aiguë et donc un marqueur de l'inflammation (polyarthrite rhumatoïde, maladie inflammatoire de l'intestin, etc.). Le degré d'inflammation est cependant plutôt évalué par la mesure du taux de CRP ou de la vitesse de sédimentation.
Un pic monoclonal correspond à la présence d'anticorps issus d'un seul clone plasmocytaire.
L'albumine est la protéine dans le sang la plus abondante. Elle est produite au niveau du foie. L'albumine joue de nombreux rôles dans l'organisme. Elle est responsable du maintien de la pression, en retenant l'eau dans les vaisseaux.
Le test « Elisa » est systématiquement utilisé depuis 2006 pour dépister la maladie, en vertu d'un protocole établi par les autorités sanitaires. S'il est négatif, le dépistage sérologique s'arrête là.
Par la sérologie de Lyme. Il s'agit d'une simple prise de sang qui permet de détecter les anticorps produits par l'organisme en cas d'infection. Les IgM apparaissent 4 à 6 semaines après morsure par une tique infestée par Borrelia, les Ig G apparaissant en 6 à 8 semaines.
La technique de dépistage consiste en un test IFi (immuno-fluorescence indirecte) ou ELISA réalisé sur un échantillon sanguin (prise de sang). Lorsque le résultat est négatif, la sérologie est à nouveau effectuée 15 jours plus tard.
Coloration au rouge Ponceau des protéines totales extraites d'un plant de tabac. Cette manipulation a lieu après le transfert des protéines d'un gel d'acrylamide vers une membrane de nitrocellulose. Elle permet de contrôler la quantité de protéines déposées sur le gel et présentes sur la membrane.
Les résultats de l'électrophorèse de l'hémoglobine sont interprétés par un hématologiste et peuvent indiquer qu'une seule des deux copies du gène est anormale (ex. : trait thalassémique) ou les deux. Les résultats sont interprétés en tenant compte du contexte clinique et des résultats de la formule sanguine.
L'évaluation de la pratique d'un professionnel de santé consiste à analyser son activité clinique réalisée par rapport aux recommandations professionnelles disponibles actualisées, afin de mettre en œuvre un plan d'amélioration de son activité professionnelle et de la qualité des soins délivrés aux patients.