Le gel se comporte comme un tamis à travers lequel les protéines se déplacent sous l'effet d'un champ électrique. Puisque les protéines possèdent une charge globale positive ou négative, une molécule protéique peut se déplacer vers le point isoélectrique où elle n'a aucune charge nette.
Lorsque les protéines ont été séparées, leur révélation sur le gel peut être effectuée en les colorant directement (Bleu de Coomassie par exemple). Cette coloration permet de visualiser toutes les protéines dans l'échantillon dont la concentration dépasse la limite de détection de la coloration.
Les gels de polyacrylamide peuvent varier en composition. Ils sont constitués d'acrylamide qui est l'unité de base et de bisacrylamide (N,N-méthylène-bisacrylamide) qui est l'agent pontant. En fonction des différents taux de ces deux substances on obtient différents maillages et donc différentes densités de gel.
En laboratoire , le SDS est communément utilisé afin de préparer des protéines pour réaliser une électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE). Le SDS supprime les liaisons non-covalentes de la protéine, permettant la dénaturation de la protéine, la molécule perd donc à terme sa conformation initiale.
Un autre agent chimique couramment utilisé est le β-mercaptoéthanol. C'est un agent réducteur qui a pour propriété de réduire les ponts disulfures des protéines, donc de détruire ces pontages covalents qui ne sont pas cassés par le SDS.
Il permet de prévenir la dégradation des échantillons thermosensibles pendant le processus d'homogénéisation.
Les gels sont formés d'au moins deux constituants : le solvant qui est un liquide majoritaire piégé par une petite quantité d'un second composé qui forme un filet à trois dimensions, ou réseau, dans tout le solvant.
Le gel est un état de la matière intermédiaire entre l'état liquide et l'état solide.
L'agarose a de larges pores : il peut servir à séparer les protéines dont le rayon mesure plus de 5 à 10 nm, comme les gros complexes protéiques. Le polyacrylamide a des pores plus petits : il peut séparer les protéines de 5 kDa à 2 000 kDa. C'est le gel le plus utilisé en électrophorèse des protéines.
L'électrophorèse d'ADN sur gel est une technique utilisée pour la détection et la séparation des molécules d'ADN. Un champ électrique est appliqué à une matrice de gel constituée d'agarose, et à l'intérieur du gel, les particules chargées vont migrer et seront séparées sur base de leur taille.
Analyse du gel
Après la migration d'électrophorèse, le gel est éclairé sous ultraviolet afin d'observer les bandes d'ADN fluorescente. Les bandes peuvent être alors découpées et séparées du gel, puis dissoutes afin de récupérer l'ADN purifié.
Le principe général est directement lié à la différence de taille des fragments d'ADN. En effet, dans un gel d'agarose, les fragments d'ADN migrent différemment suivant leurs tailles. Cela permet, en découpant des morceaux de gel, de récupérer l'ADN d'intérêt. Deux gels sont généralement utilisés.
L'électrophorèse sur gel d'agarose est communément utilisée pour séparer des molécules en fonction de leur charge, leur taille et leur forme. Il s'agit d'un moyen de séparation particulièrement efficace pour des biomolécules chargées telles que l'ADN, l'ARN et les protéines.
Le bleu de bromophénol (aussi appelé BBP) ou tétrabromophénolsulfonephthaléine est un colorant de la famille des sulfonephtaléines utilisé comme indicateur coloré de pH. Il est jaune pâle pour un pH < 3, et bleu pour un pH > 4,6. Il peut parfois être utilisé comme teinture bleue en milieu neutre.
En physique, un état de la matière est une des quatre formes ordinaires que peut prendre toute substance dans la nature : solide, liquide, gaz, plasma. Diverses propriétés de la matière diffèrent selon l'état : degré de cohésion, densité, structure cristalline, indice de réfraction…
Plasma : à la rencontre du 4e état de la matière.
Combien de fois l'utiliser et quelles quantités
On peut néanmoins hydrater ses mains avec une crème douce entre les différentes utilisations de gel, surtout si on a une peau à tendance sèche ou sensible. Les médecins et virologues conseillent une dose de 3 ml par utilisation.
THERMYFROST est un liquide antigivre étudié spécialement pour la protection, par grand froid, du givre et des pluies verglaçantes qui paralysent les réseaux électriques de transport (Tramway, trains, bus, métro, …).
Le Western-Blot
Or la confirmation par WB n'est demandée qu'en cas d'ELISA positif ou équivoque, ce qui pourrait priver un grand nombre de patients d'un diagnostic sérologique et les laisser seuls avec leurs symptômes.
En France, à Paris et en province, le laboratoire Barla http://labo-barla.eu/ réalise les tests sérologies (Elisa et Western Blot), les PCR, Elispot et les analyses d'exploration du système immunitaire : – PCR pour Borrelia, Bartonella, Rickettsies, Anaplasma, Ehrlichia, Coxiella, Francisella, Néoehrlichia mikurensis.
L'interprétation repose sur la distinction de l'isotype : la présence d'IgM évoque une infection à un stade précoce ; les IgM sont encore présentes en début de phase secondaire mais absentes en phase tertiaire ; les IgG apparaissent en fin de phase primaire et sont présentes à titre élevé en phase tertiaire.